GLORI技术服务

单碱基分辨率m⁶A定位与绝对定量分析

m⁶A修饰与翻译调控

m⁶A是真核mRNA中最丰富的内部修饰之一,广泛参与RNA命运调控。近年来的研究表明,m⁶A不仅影响mRNA的稳定性、剪接与核输出等经典过程,更在蛋白质翻译层面发挥关键作用,例如调控翻译起始、影响核糖体加载以及参与uORF和非经典ORF的翻译调控等。

现有m⁶A检测技术的局限性

尽管m⁶A研究已得到广泛关注,但现有检测方法在仍存在明显局限,限制了其在机制研究中的深入应用。

分辨率不足
MeRIP‑seq等方法仅能提供区域性信号(约100‑200 nt),无法精确到单碱基分辨率
存在检测偏好性
依赖抗体或酶的检测策略易引入序列或结构偏好性(Bias),影响m⁶A位点识别的准确性与重复性
缺乏定量能力
多数方法仅能判断是否存在修饰,难以获得m⁶A修饰比例及其动态变化
低输入适配性差
对RNA起始量要求较高,难以应用微量样本
GLORI-seq技术服务

新使生物(NeoRibo)联合北京大学伊成器教授完成GLORI技术转化,推出GLORI-seq 2.0/3.0技术服务,实现稳定、高精度的m⁶A绝对定量分析。

GLORI-seq技术原理

GLORI-seq是一种非抗体依赖的m⁶A单碱基定位与定量技术。

其核心原理是利用化学反应选择性区分未修饰腺苷(A)与m⁶A:通过脱氨反应,使RNA中绝大多数未修饰A转化为肌苷(I),在反转录和测序过程中被读取为G;而m⁶A由于N⁶位甲基的保护作用,对该反应具有抗性,因此仍被读取为A。

因此,通过比较特定位点测序结果中 A与G的比例,不仅能够在单碱基水平定位m⁶A,还能够计算该位点的m⁶A修饰比例(stoichiometry),实现位点级绝对定量分析。

m⁶A检测技术对比
方法 分辨率 抗体依赖 定量能力 偏好性 适用场景
MeRIP‑seq 低(100‑200 nt) 是 无 高 初步筛选
miCLIP 单碱基 是 部分 高 精细定位
DART‑seq 中 否 有限 中 特定体系
Direct RNA‑seq 单碱基 否 有限 中 修饰探索
GLORI‑seq 单碱基 否 绝对定量 极低 全面研究
核心指标 GLORI‑seq 1.0 GLORI‑seq 2.0 GLORI‑seq 3.0
反应体系 分步反应(含G保护) 一步法反应 一步法反应
低丰度 RNA检测灵敏度 中 高 高
样本量 > 5 × 10⁵ cells (10 μg Total RNA) > 5 × 10⁴ cells (1 μg Total RNA) >5000 cells (100 ng Total RNA)
相比GLORI‑seq 1.0,GLORI‑seq 2.0显著降低RNA降解并提升检测灵敏度,GLORI‑seq 3.0进一步突破样本量限制,实现微量样本的稳定检测
技术优势

新使生物(NeoRibo)联合北京大学伊成器教授完成GLORI技术转化,推出GLORI-seq 2.0/3.0技术服务,实现稳定、高精度的m⁶A绝对定量分析

绝对定量能力
评估m⁶A修饰比例,支持动态变化分析
高灵敏度
提高低丰度转录本m⁶A检测能力
单碱基分辨率
实现m⁶A位点级精准定位
低起始量
适用于低输入样本及微量样本
极低偏好性
基于化学反应策略,避免抗体或酶引入的检测偏好性
项目分类

针对不同样本量及研究需求,我们提供2项细分技术服务方案:

★
常规量GLORI‑seq 2.0
通过优化反应体系,降低RNA降解风险并提升检测稳定性,适用于常规及低输入样本
★
微量GLORI‑seq 3.0
在2.0基础上引入新的建库策略,降低样本损失,实现超低输入条件下的稳定检测
应用场景
◆
m⁶A定量分析:实现位点级修饰比例评估及动态变化研究
◆
翻译调控研究:结合Ribo-seq解析m⁶A对翻译效率及非经典ORF的影响
◆
疾病机制研究:用于解析m⁶A在肿瘤等疾病中的调控作用
◆
低输入样本研究:适用于分选细胞及微量临床样本
平台优势

新使生物专业翻译组学平台,构建了覆盖RNA调控的翻译多组学技术体系:

◆
高分辨率Ribo-seq: 解析核糖体占据与翻译动态
◆
Polysome profiling: 评估翻译活性与mRNA分布状态
◆
RNC-seq: 捕获核糖体结合RNA,反映翻译进行中的转录本
◆
tRNA-seq: 解析翻译系统的解码能力
◆
tsRNA-seq: 解析tRNA来源小RNA图谱
◆
PAlso-seq: 解析poly(A)尾长度与组成,连接mRNA稳定性与翻译效率
◆
GLORI-seq: m⁶A绝对定量检测,探究RNA修饰对翻译调控的影响
验证码

我们团队会在24小时内回复

有任何疑问和建议请随时联系

邮箱: service@neoribo.com